Cytométrie en Flux

Présentation :

La plateforme de cytométrie en flux de l’IMRB se situe au 1er étage du batiment Recherche de l’hôpital Henri Mondor.

Elle est équipée de deux trieurs de cellules  (BD Influx Sorp et BD Aria Fusion) et de deux analyseurs (BD Fortessa X20 et Miltenyi Biotec MACSQuant 16), permettant de caractériser et d’isoler des éléments (cellules, bactéries, …) d’une suspension mono-dispersés rendus fluorescent de façon spécifique.

Les projets développés sur la plateforme sont d’origines variées mais concernent principalement la recherche en immunologie, incluant entre autre, l’étude de la fonction immune, de la résistance aux drogues, de la prolifération cellulaire, de l’apoptose et du cycle cellulaire.​

 

Compétences et Expertise :

Domaine d’expertise scientifique et technique: biologie cellulaire, immunologie

Compétences et savoir-faire : Analyse et tri cellulaire par cytométrie.

 

Matériels disponibles

La plateforme gère et assure la maintenance et le contrôle qualité des instruments suivants :

Trieur : Influx (BD Biosciences)

  • 4 lasers (488, 640, 405 et 561nm)
  • 2 paramètres de morphologie (taille et granulosité),
  • 18 paramètres de fluorescence :
  • Laser 488nm : 520/15, 530/40, 670/30 et 710/50.
  • Laser 640nm : 670/30, 720/40 et 750LP.
  • Laser 405nm : 460/50, 520/35, 610/20, 660/20, 710/50 et 750LP.
  • Laser 561nm : 585/29, 610/20, 670/30, 710/50 et 750LP.
  • Détecteur microparticules (<0,2µm).
  • 70 000 évènements par seconde.
  • Jusqu’à 6 voies de tri, 4 types de buses (70, 86, 100 et 140µm).
  • Température contrôlée (de 5°C à 95°C),
  • Récupération dans des microtubes, des tubes à hémolyse ou des tubes falcon de 15 et 50 mL. Option de clonage sur plaques de culture (6/24/48/96/384 puits) ou lame de microscope.​

Trieur : Aria Fusion (BD Biosciences)

  • 4 lasers (488, 640, 405 et 561nm)
  • 2 paramètres de morphologie (taille granulosité)
  • 16 paramètres de fluorescences
  • Laser 488nm : 530/30, 695/40.
  • Laser 640nm : 670/30, 730/45 et 780/60.
  • Laser 405nm : 450/50, 525/50, 610/20, 660/20, 710/50 et 780/60.
  • Laser 561nm: 582/15, 610/20, 670/14, 710/50, 780/60
  • Jusqu’4 voies de tri
  • 3 types de buses (70, 85, 100µm)
  • Récupération en tube FACS et eppendorf ou 15mL
  • Option de clonage sur plaque de culture
  • Enceinte de confinement de Classe II type 2

Analyseur : LSR Fortessa X20 (BD Biosciences)

  • 4 lasers (488, 640, 405 et 561nm)
  • 2 paramètres de morphologie (taille et granulosité)
  • 16 paramètres de fluorescence
  • Laser 488nm : 520/30, 695/40.
  • Laser 640nm : 670/14, 730/45 et 780/60.
  • Laser 405nm : 450/50, 525/50, 610/20, 670/30, 710/50 et 780/60.
  • Laser 561nm : 586/15, 610/20, 670/30, 710/50 et 780/60.
  • 20 000 évènements par seconde.

Analyseur : MACSQuant 16 (Milteny Biotec)

  • 3 lasers (405, 488 et 640nm)​
  • 2 paramètres de morphologie (taille et granulosité)
  • 14 paramètres de fluorescence
  • Pour le laser 4​​​88nm :​ 525/50, 579/34, 615/20, 667/30, 725/40 et 785/62
  • Pour le laser 640nm :​ 667/30, 725/40 et 785/62
  • Pour le laser 405nm : 450/50, 525/50, 579/34, 615/20 et 667/30
  • 15 000 évènements par seconde
  • Numération absolue
  • Passeur automatique tube FACS, eppendorf,  Falcon ou plaque
  • Remise en suspension de l’échantillon (par aspiration)

Poste d’analyse Flow-Jo

Services proposés :

  • Tris cellulaires.
  • Analyse de cytométrie en flux.
  • Formations à l’acquisition, à l’analyse et à l’interprétation des résultats obtenus.
  • Mise à disposition des cytomètres (LSR-X20,MQ16 ou Aria) après validation de la formation.
  • Analyse de données (logiciel Flow-Jo).
  • Conseils aux utilisateurs.

Conditions d’Utilisation :

La plateforme est ouverte à toutes les équipes de l’IMRB et aux équipes extérieures (des secteurs public et privé) qui en feraient la demande. Les équipes désirant travailler avec cette plateforme doivent d’abord rencontrer les responsables techniques pour présenter leur projet et établir un planning prévisionnel d’utilisation.

Horaires d’ouverture :

Du lundi au vendredi de 8h30 à 17h30. Réservations par mail à l’adresse suivante : cytometrie.imrb@inserm.fr.

En dehors de ces horaires, il est possible de planifier des rendez-vous en accord et en fonction des disponibilités du personnel de la plateforme.

Localisation :

1er étage du bâtiment Recherche de l’hôpital Henri Mondor

Portes AA-061 et AA-064

Contact :

Nous contacter

Les documents, à destination des agents, mis à disposition par la plateforme de cytométrie se trouvent dans la bibliothèque de données de la page d’accueil de la plateforme.

La norme ISO 9001 définit une série d’exigences concernant la mise en place d’un système de management de la qualité dans un organisme, quels que soient sa taille et son secteur d’activité.

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