Présentation
La plateforme Luminex de l’IMRB se situe au 1er étage du bâtiment Recherche de l’hôpital Henri Mondor (Plan d’accès à la plateforme).
Elle est équipée d’un appareil Bio-Plex 200 permettant, grâce à la technologie xMAP de Luminex, de détecter et de quantifier à partir de 25 µl d’échantillon jusqu’à 100 analytes différents. La plateforme est équipée de tout le matériel nécessaire à la réalisation de dosages complets suivants les protocoles des différents fournisseurs de kits Luminex.
Le matériel ainsi que le personnel de cette plateforme sont mis à disposition par la plateforme immunomonitoring de l’équipe Physiopathologie et Immunothérapies dans l’Infection VIH (équipe 16) de l’IMRB et du Vaccine Research Institute. Depuis la création de la plateforme Luminex en 2011, plus de 75 dosages complets ont été réalisés.
Mots-Clés
- Luminex
- Bio-plex 200
- Multiplex
- Surnageant
- Sérum
- Plasma
- Sécrétions
Compétences et Expertise
- Domaine d’expertise scientifique et technique: biologie cellulaire, immunologie, physiopathologie.
- Compétences et savoir-faire: dosage de cytokines, chimiokines, facteurs de croissance et autres marqueurs métaboliques, cardiaques ou du cancer. Analyse d’expression de phosphoprotéines ou encore d’ARN.
Matériels disponibles
- La Bio-Plex Washstation permet de réaliser les lavages avec des kits Luminex utilisant aussi bien des billes en polystyrène que des billes magnétiques.
- Le Bio-Plex 200 est un système ouvert permettant l’utilisation de plusieurs types de kits de dosage (Bio-Rad, Merck-Millipore, bio-techne, Affymetrix) et d’échantillons (plasma, sérum, lysat tissulaire, surnageant de culture, sécrétions) provenant de plusieurs espèces (homme, souris, rat, singe, chien, chat, porc).
Le Bio-Plex 200 est un analyseur construit autour de trois technologies :
– La première est la famille des microsphères (ou billes) fluorescentes. Ces dernières sont marquées avec différents ratios de 2 fluorophores dont les spectres d’émission sont différents afin d’assigner à chaque bille une signature spectrale unique. Chaque ensemble de bille est ensuite conjugué à une molécule de capture (enzyme/substrats, ADN, récepteurs, antigènes, anticorps).
– La seconde est un cytomètre de flux équipé de 2 lasers et toute l’optique associée afin de mesurer les réactions biochimiques qui ont lieu à la surface des microsphères. Afin de détecter et quantifier chaque analyte, une molécule de détection reconnaissant spécifiquement l’analyte ainsi qu’une molécule reportrice fluorescente sont ajoutées. Le laser rouge excite ensuite les marqueurs fluorescents de chaque bille, puis le laser vert excite la molécule fluorescente reportrice associée à la bille, permettant ainsi la quantification de l’analyte capturé.
– La troisième est un processeur de signaux numériques haute vitesse permettant de transformer les signaux fluorescents en données (Intensités de Fluorescence et concentrations).
La Bio-plex Washstation ainsi que le Bio-Plex 200 sont sous contrat de maintenance avec la société Bio-Rad. Ils sont vérifiés et entretenus chaque année.
Les pipettes utilisées par le personnel de la plateforme sont également vérifiées chaque année.
Le personnel de la plateforme a été formé pour travailler sur cette technologie Luminex et plus particulièrement avec l’analyseur Bio-Plex 200. Il est compétent et possède une expertise. Le Bio-Plex 200 est sous la responsabilité du responsable technique, lui seul est habilité à réaliser les manipulations.
Services proposés
- Lecture de la plaque (dosage réalisé par l’utilisateur) :
- les résultats sont transmis par e-mail à l’utilisateur sous forme de fichier Excel®
- analyse possible des résultats (en collaboration avec l’utilisateur)
- Dosage complet (kit fourni par l’utilisateur) :
- suivant le protocole du kit
- les résultats sont transmis par e-mail à l’utilisateur sous forme de fichier Excel®
- analyse possible des résultats (en collaboration avec l’utilisateur)
Exemples de prestations réalisées
- Réalisation de dosages Luminex 29-plex et 27-plex chez des patients atteints de myofasciite à macrophages (MMF) [Cadusseau et al., Curr Med Chem, 2014] et de broncho-pneumopathie chronique obstructive (BPCO) [Boyer et al., PLoS One, 2015]
